iRepertoire的技术优势

与健康人群相比,各类疾病患者的免疫组库在数量或性质上可能发生变化。数量的变化可能是免疫组库多样性的增加或减少。性质的变化主要表现为在T细胞或B细胞中疾病相关特异性CDR3s的增加或减少。

优良的扩增技术是定量和定性研究免疫组库的关键。一个好的扩增方法应该是具有覆盖的全面性且能够半定量的。全面覆盖意味着在一个样本中10-50万不同的CDR3s可以在一个实验中全部被扩增,半定量意味着扩增过程中不会引入偏差。iRepertoire开发了一种多重PCR方法,可以用来全覆盖和半定量地扩增免疫基因组。

优良的多重PCR应该具有特异性、敏感性、多重能力、定量、靶点扩增均匀、使用方便、设计开发方便、速度快、价格低等特点。在过去的十几年里,我们一直致力于开发和研究多重PCR(mPCR)技术,拥有可用于多位点的多重PCR技术发明专利。嵌套引物是针对在多重扩增中需要被共同放大的所有位点(Fo、Fi、Ro和Ri)设计的。所有位点的内部引物共享相同的标签序列,该序列将结合到一对“超级引物”(FS和RS)。在由极低浓度特异性的嵌套引物和高浓度超级引物混合而成的同一反应体系中,目标基因能够进行指数扩增。tem-PCR 技术之所以有效,是因为它解决了多重扩增引物(位点)的不兼容问题。

在2009年,我们开发了新一代mPCR技术,arm-PCR (扩增子拯救多重PCR,专利号:7999092)。对于arm-PCR,我们在初始的PCR循环中使用了高浓度的嵌套引物。然后以第一轮扩增过程中已经引入识别共享标签的序列为模板,通过添加新的通用引物和酶,来进行第二轮的PCR检测。在mPCR中,由于扩增的指数阶段是由一对引物对所有潜在目标进行的,所以所有的CDR3s都以半定量的方式被放大。

多重PCR的常见难点:引物效率不一,靶点扩增条件不一,背景扩增,引物二聚体。

针对这些难点,我们成功的给出了解决方案:

  • 覆盖全面

  • 靶点扩增均匀

  • 高特异性

  • 高敏感性

  • 可定量

  • 可同时扩增多个靶点

iRepertoire免疫组库测序技术优势

一站式服务

提供样本处理、扩增、建库、测序、后续信息分析以及数据挖掘等一系列全方位的服务

多样的测序平台

可根据要求选择Illumina、 Roche或Ion Torrent等

富有针对性的研究方法

专门针对CDR3的V区及J区两端设计引物,目的扩增CDR3区域

高保真的扩增技术

采用拥有专利的独特多重PCR技术,实现不同克隆等效扩增,Unique克隆数高达105

服务热线:400-823-5011

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